肝臟是一個(gè)復(fù)雜的器官，由多種細(xì)胞類型組成。 其中大部分（60-80%）是實(shí)質(zhì)細(xì)胞——肝細(xì)胞。 其余細(xì)胞形成異質(zhì)的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞 (NPC) 群，主要由肝內(nèi)皮細(xì)胞 (LEC)、巨噬細(xì)胞（KF），肝星狀細(xì)胞 (HSC) 和免疫細(xì)胞組成。 肝內(nèi)免疫細(xì)胞是 NPC 突出的成分（高達(dá) 50%），由 T 細(xì)胞（CD8+ 和 CD4+）、B 細(xì)胞、自然殺傷 (NK) 和自然殺傷T (NKT) 細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞 (DC) 和巨噬細(xì)胞的各種亞型組成。 肝臟免疫細(xì)胞的相對組成因生理?xiàng)l件和物種而異，例如，小鼠肝臟中的 NKT 細(xì)胞比人類多。 肝臟免疫細(xì)胞組成不同于淋巴器官或血液，因?yàn)楦闻K富含 CD4+ T 細(xì)胞、NK、NKT 和 γ δ (γδ) T 細(xì)胞。細(xì)胞比例分布參考如下圖。

一般來說，肝臟主要是致耐受性器官，對于預(yù)防對飲食和腸道菌群的炎癥反應(yīng)很重要。 因此，NPC 積極促進(jìn)免疫耐受，例如，肝細(xì)胞、枯否細(xì)胞 (KC) 和 LEC 誘導(dǎo) T 細(xì)胞無反應(yīng)。 此外，肝竇LEC (LSEC) 產(chǎn)生稱為 LSECtin 的凝集素，可觸發(fā) CD8+ T 細(xì)胞耐受。 此外，KC 分泌抗炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素 10 (IL10) ，肝臟駐留的 NK 細(xì)胞可通過與免疫檢查點(diǎn)通路的相互作用抑制 T 細(xì)胞。 在某些病理?xiàng)l件下，例如感染、炎癥性疾病或癌癥，肝臟免疫細(xì)胞的分布或功能可能會發(fā)生變化。 這可能導(dǎo)致潛在的不平衡和免疫細(xì)胞串?dāng)_的改變。

為了更好地了解影響肝臟的各種病理，需要對常駐/浸潤性免疫群體進(jìn)行分離、免疫表型分析和量化。 目標(biāo)是獲得高產(chǎn)量的單細(xì)胞懸液，同時(shí)仍保留抗原/表位譜（最小表位降解）并為后續(xù)下游應(yīng)用保留細(xì)胞活力。為了避免存在于血液中免疫亞群中的肝臟交叉污染，肝臟的原位灌注是通過腔靜脈或門靜脈進(jìn)行的。 另一個(gè)關(guān)鍵步驟是正確處理肝組織。 組織解離可以通過機(jī)械破壞、使用膠原酶的酶消化或兩種方法的組合來進(jìn)行。 對于肝臟免疫細(xì)胞表型分析，需要從獲得的勻漿中去除肝細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兛赡軙蓴_以后的下游免疫分析。 可以通過多個(gè)離心步驟或通過 Percoll 或 Iodixanol 密度梯度進(jìn)一步純化細(xì)胞懸液。 然而，這個(gè)過程既費(fèi)時(shí)又費(fèi)材料。 此外，純化方法的苛刻條件也可能影響用于任何下游應(yīng)用的細(xì)胞的活力和/或功能。

小鼠肝臟灌注方案：

(A) 揭開和拉伸門靜脈以進(jìn)行灌注。 (B) 肝灌注。 (C) 漸進(jìn)式灌注肝臟。 (D) 解離的材料準(zhǔn)備。 帶有細(xì)胞培養(yǎng)基的 C 管，含解離肝臟的酶。 (E) 肝臟與解離混合物一起放入 C 管中。 (F) 解離后的肝臟勻漿。 (G) 分離組織的濾液。 (H) 基于密度梯度的細(xì)胞純化（細(xì)胞懸液頂部的碎片去除溶液層；離心前）。 (I) 獲得的細(xì)胞被殘留的紅細(xì)胞污染。 (J) 去除紅細(xì)胞后的最終NPC。

小鼠肝臟流式檢測Marker方案：

小鼠肝臟巨噬細(xì)胞清除方案：

LIPOSOMA的ClodronateLiposomes氯膦酸鹽二鈉脂質(zhì)體（貨號：CP-005-005）清除肝臟巨噬細(xì)胞，頻頻見于Cell，Nature和Science。詳細(xì)文獻(xiàn)可以聯(lián)系靶點(diǎn)科技技術(shù)支持索取全文。清除單核巨噬細(xì)胞是研究巨噬細(xì)胞體內(nèi)功能的重要工具。